全球非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是一种高发的肝脏疾病，随着对肝脏纤维化检测需求的不断增长，其重要性愈加凸显。肝纤维化（HF）是肝脏受损后常见的病理性修复反应，且是慢性肝病转变为肝硬化的关键步骤。HF的发病机制极为复杂，肝脏损伤会激活多种细胞释放一系列细胞因子，从而启动下游信号通路，活化肝星状细胞（HSCs），并促使其转化为肌成纤维细胞（MFBs）。MFBs会释放大量细胞外基质（ECM），破坏肝脏的正常结构，导致HF的发生与进一步发展。目前，针对HF的治疗靶点仍处于动物实验阶段，尚未实现临床应用。

细胞因子TGF-β在HF的诱导机制中发挥着重要角色。TGF-β可以调节细胞生长、分化、ECM重构等过程。在哺乳动物中，TGF-β家族包括三种亚型（TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3），它们之间的序列和结构相似性高达70%-82%。特别是TGF-β1在各组织中的表达水平和生物活性良好，对纤维化疾病的发展影响显著。TGF-β信号通路被认为是促进HSC活化及诱导ECM生成的关键通路。肝脏受到损伤刺激时，TGF-β通过与TGFβⅡ型受体（TβRⅡ）结合启动信号传导，随后招募TGF-βⅠ型受体（TβRⅠ），使其发生构象变化，进而促使下游SMAD2和SMAD3蛋白医磷酸化，形成复合物与SMAD4共同作用于细胞核，调节多种靶基因的转录，最终导致HSC活化，并诱导Ⅰ型和Ⅲ型胶原的合成。其中，SMAD7则对该通路产生抑制作用。

在HF相关的实验研究中，LX-2细胞是应用最广泛的HSCs体外模型之一。LX-2细胞能够保留活化HSCs的关键特征，如细胞因子信号传导、基因表达、维甲酸代谢及纤维形成等，广泛应用于肝炎以及纤维化的体外研究，并在纤维母细胞样转化研究中发挥重要作用。LX-2细胞通过常规培养，在含10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素溶液的高糖DMEM完全培养基中生长，待细胞密度达到80%-90%时传代。实验前需要用1%血清DMEM进行24小时的饥饿处理。细胞分为两个组别：正常组不做处理，模型组则使用10ng/mL的TGF-β1（Cat No: CA59）诱导LX-2肝星状细胞活化，培养24小时后收集细胞进行模型评估。

在构建纤维化模型时，有多个因素需考虑，包括血清饥饿处理、细胞密度、因子浓度及作用时间等。文献中通常采用5–10ng/mL的TGF-β1进行24–48小时的处理，但具体浓度与时间应根据细胞反应进行相应调整。对纤维化模型的评价方法包括检测纤维蛋白的合成与沉积、观察细胞形态变化，以及测定相关蛋白和基因的表达水平等。这些评估方法可全面了解细胞纤维化的发生过程及机制。

通过Transwell法检测LX-2细胞在TGF-β1刺激下的纵向迁移能力，以及EdU实验评估模型组细胞的增殖能力，结果显示迁移和增殖能力显著提升。此外，利用免疫荧光（IF）、Western blot（WB）或PCR方法检测α-SMA和CollagenⅠ在LX-2细胞中的表达情况，模型组中这两种蛋白的表达均显著上升。WB实验进一步显示，TGF-β1显著上调了Smad2和Smad3的磷酸化，并抑制了Smad7的表达。基于此，尊龙凯时提供的重组TGF-β1蛋白为此类研究提供了低内毒素、高纯度和高活性的理想选择。

尊龙凯时的产品在多种类型的细胞培养中展现出优良性能，并且现有的TGF-β相关产品超过二十种，可以满足靶向TGF-β的药物研发、功能评估及质量控制等各个环节的需求。我们期待与更多科研团队携手，共同推动生物医疗领域的研究进展。